Kit Elisa para Fator de Necrose Tumoral Alfa de Rato

Kit ELISA TNF-α do tumor necrosis factor α de rato, Cachectina, TNF, TNFSF2, TNF-α

Kit Elisa Alfa do Fator de Necrose Tumoral de Rato Para Tnf Alfa 48 Poços

Materiais fornecidos com o kit

Princípio

Este kit ELISA usa Sandwich-ELISA como método. A microplaca de tiras de microelisa fornecida neste kit foi pré-revestida com um anticorpo específico para TNF-α . Padrões ou amostras são adicionados aos poços apropriados da microplaca de tiras de microelisa e combinados ao anticorpo específico. Em seguida, um anticorpo conjugado com peroxidase de rábano (HRP) específico para TNF-α é adicionado a cada poço da microplaca de tiras de microelisa e incubado. Os componentes livres são lavados. A solução de substrato TMB é adicionada a cada poço. Apenas aqueles poços que contêm TNF-α e anticorpo de trombomodulina conjugado com HRP aparecerão na cor azul e, em seguida, ficarão amarelos após a adição da solução de parada. A densidade óptica (DO) é medida espectrofotometricamente em um comprimento de onda de 450 nm. O valor de DO é proporcional à concentração de TNF-α. Você pode calcular a concentração de TNF-α nas amostras comparando a DO das amostras com a curva padrão.

Notas:

• Armazene o kit a 4°C após o recebimento. O kit deve ser equilibrado à temperatura ambiente antes do ensaio. Remova quaisquer tiras desnecessárias da placa revestida com anticorpo TNF-α, sele-as novamente em papel alumínio com zíper e mantenha a 4°C.
• Precipitações podem aparecer no tampão de lavagem concentrado. Aqueça o tampão para dissolver todas as precipitações, o que não afetará os resultados.
• Pipetas precisas devem ser usadas para evitar erros experimentais. As amostras devem ser adicionadas à microplaca em menos de 5 minutos. Se um grande número de amostras for incluído, uma pipeta de vários canais é recomendada.
• A curva padrão deve ser incluída em cada ensaio. Poços replicados são recomendados. Se o valor de DO da amostra for maior que o primeiro poço dos padrões, dilua a amostra (n vezes) antes do teste. Ao calcular a concentração original de trombomodulina, multiplique o fator de diluição total (XnX5).
• Para evitar a contaminação cruzada, os seladores de microplacas são apenas para uso único.
• Mantenha o substrato longe da luz.
• Toda a operação deve estar de acordo com as instruções do fabricante estritamente. Os resultados determinados pelo Leitor de Microplacas.
• Todas as amostras, tampão de lavagem e resíduos devem ser tratados como agentes infecciosos.
• Reagentes de diferentes lotes não devem ser misturados.

Concentrações conhecidas do padrão TNF-a e sua DO de leitura correspondente são plotadas na escala logarítmica (eixo x) e na escala logarítmica (eixo y), respectivamente. A concentração de TNF-a na amostra é determinada plotando a DO da amostra no eixo Y. A concentração original é calculada multiplicando o fator de diluição.