Princípio do ensaio
Este kit permite a determinação das concentrações de P53 no soro do rato, nos supernatados de cultura celular e noutros fluidos biológicos.
O kit analisa o nível de CD16 humano na amostra, usa o anticorpo purificado de CD16 humano para revestir os poços da placa de microtiter, faz um anticorpo de fase sólida, e depois adiciona CD16 aos poços,Anticorpo CD16 combinado que com HRP marcado, tornam-se anticorpo - antígeno - enzima - complexo de anticorpos, após a lavagem Completamente, adicionar solução de substrato TMB, substrato TMB torna-se de cor azul em HRP enzima-catalisada,A reação é terminada pela adição de uma solução de ácido sulfúrico e a mudança de cor é medida espectrofotometricamente a um comprimento de onda de 450 nmA concentração de CD16 humano nas amostras é então determinada comparando a D.O. das amostras com a curva padrão.
Materiais fornecidos com o k- Não.
| 1 |
solução de lavagem |
20 ml × 1 frasco |
7 |
Parar a Solução |
6 ml × 1 frasco |
| 2 |
Reagente HRP-conjugado |
6 ml × 1 frasco |
8 |
Padrão ((20 μg/l) |
0.5 ml × 1 frasco |
| 3 |
Microelisa stripplate |
12 bem × 8 tiras |
9 |
Diluente padrão |
1.5 ml × 1 frasco |
| 4 |
Diluente da amostra |
6 ml × 1 frasco |
10 |
Instruções |
1 |
| 5 |
Solução de cromogénio A |
6 ml × 1 frasco |
11 |
Membrana da placa de fecho |
2 |
| 6 |
Solução de cromogénio B |
6 ml × 1 frasco |
12 |
Sacos selados |
1 |
Requisitos em matéria de amostras
- A partir daí, a utilização de um laboratório de ensaio deve ser efectuada no local de ensaio, em conformidade com a literatura pertinente.A amostra pode ser mantida a -20 °C para preservarEvite ciclos de congelamento- descongelamento repetidos.
- Não é possível detectar a amostra que contém NaN3, porque NaN3 inibe o HRP ativo.
Procedimento de avaliação
- Diluir e adicionar amostra:Diluir Padrão de densidade original conforme o quadro seguinte:
| 10 μg/l |
5 Padrão |
150 μl Densidade original Padrão+150 μl Diluente padrão |
| 5 μg/l |
4 Padrão |
150 μl 5 + 150 μl diluente padrão |
| 2.5 μg/l |
3 Padrão |
150 μl 4 + 150 μl diluente padrão |
| 10,25 μg/l |
2 Padrão |
150 μl 3 + 150 μl diluente padrão |
| 00,625 μg/l |
1 Padrão |
150 μl 2 + 150 μl diluente padrão |
2. adicionar amostra: Colocar os poços em branco separadamente (os poços de comparação em branco não adicionam amostra e reagente HRP-Conjugate, senão cada etapa é a mesma).Adicionar 50 μl de pó padrão à estripla de Microelisa, adicionar 40μl de dilução da amostra ao poço de amostra de ensaio, adicionar 10μl de amostra de ensaio (a diluição final da amostra é de 5 vezes), adicionar amostra aos poços, não tocar a parede do poço tanto quanto possível e misturar suavemente.
3.Incubar: Após fechar a placa com a membrana da placa de fechamento, incubar durante 30 min a 37°C.
4.Configurar líquido: 30 (ou 20) vezes solução de lavagem diluída 30 (ou 20) vezes com água destilada e reserva.
5. lavagem: Descobrir a membrana da placa de fechamento, descartar o líquido, secar por balanço, adicionar tampão de lavagem a cada poço, permanecer por 30 segundos e depois drenar, repetir 5 vezes, secar por batida.
6. adicionar enzima: adicionar 50 μl de reagente HRP-Conjugado a cada poço, exceto poço em branco.
7.Incubação: Operação com 3.
8. lavagem: operação com 5.
9.color: Adicionar solução de cromogénio A 50ul e solução de cromogénio B 50ul a cada poço, evitar a preservação da luz durante 15 minutos a 37°C
10.Parar a reação: Adicionar solução de parada50μl para cada poço, Parar a reação ((a cor azul muda para amarelo).
11. ensaio: tomar o poço em branco como zero, ler a absorvência a 450 nm após a adição da solução stop e no prazo de 15 min.
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