Descrição do produto:
Objetivo
Este kit permite a determinação das concentrações de VCAM-1 no soro humano, nos supernatados de cultura celular e noutros fluidos biológicos.
Princípio do ensaio
O kit analisa o nível de VCAM-1 Humano na amostra, usa o anticorpo Humano VCAM-1 Purificado para revestir os poços da placa de microtiter, faz um anticorpo de fase sólida, e depois adiciona o VCAM-1 aos poços,Anticorpo combinado VCAM-1 que com HRP marcado, tornam-se anticorpo - antígeno - complexo de enzimas-anticorpos, após lavagem Completamente, adicionar solução de substrato TMB, substrato TMB torna-se de cor azul em HRP enzima-catalisada,A reação é terminada pela adição de uma solução de ácido sulfúrico e a mudança de cor é medida espectrofotometricamente a um comprimento de onda de 450 nmA concentração de VCAM-1 humano nas amostras é então determinada comparando a D.O. das amostras com a curva padrão.
Materiais fornecidos com o kit
| 1 |
solução de lavagem |
20 ml × 1 frasco |
7 |
Parar a Solução |
6 ml × 1 frasco |
| 2 |
Reagente HRP-conjugado |
6 ml × 1 frasco |
8 |
Padrão ((960μg/l) |
0.5 ml × 1 frasco |
| 3 |
Microelisa stripplate |
12 bem × 8 tiras |
9 |
Diluente padrão |
1.5 ml × 1 frasco |
| 4 |
Diluente da amostra |
6 ml × 1 frasco |
10 |
Instruções |
1 |
| 5 |
Solução de cromogénio A |
6 ml × 1 frasco |
11 |
Membrana da placa de fecho |
2 |
| 6 |
Solução de cromogénio B |
6 ml × 1 frasco |
12 |
Sacos selados |
1 |
Parâmetros técnicos:
| Nome do produto |
VCAM-1 RUO Kit Elisa |
| Fabricante |
Biovantion Inc. |
| Método |
RUO ELISA |
| Tipo de amostra |
Serum |
| Tamanho da embalagem |
96 Ensaios |
| Sensibilidade |
95% |
| Especificidade |
98% |
| Período de validade |
6 meses |
| Temperatura de armazenamento |
2-8°C |
Requisitos em matéria de amostras
- A partir daí, a utilização de um laboratório de ensaio deve ser efectuada no local de ensaio, em conformidade com a literatura pertinente.A amostra pode ser mantida a -20 °C para preservarEvite ciclos de congelamento- descongelamento repetidos.
- Não é possível detectar a amostra que contém NaN3, porque NaN3 inibe o HRP ativo.
Procedimento de avaliação
- Diluir e adicionar amostra:Diluir Padrão de densidade original conforme o quadro seguinte:
| 480 μg/l |
5 Padrão |
150 μl Densidade original Padrão+150 μl Diluente padrão |
| 240 μg/l |
4 Padrão |
150 μl 5 + 150 μl diluente padrão |
| 120 μg/l |
3 Padrão |
150 μl 4 + 150 μl diluente padrão |
| 60 μg/l |
2 Padrão |
150 μl 3 + 150 μl diluente padrão |
| 30 μg/l |
1 Padrão |
150 μl 2 + 150 μl diluente padrão |
|
2. Adicionar amostra: Colocar os poços em branco separadamente (poços de comparação em branco não adicionam amostra e reagente HRP-Conjugate, senão cada etapa é a mesma).Adicionar 50 μl de pó padrão à estripla de Microelisa, adicionar 40μl de dilução da amostra ao poço de amostra de ensaio, adicionar 10μl de amostra de ensaio (a diluição final da amostra é de 5 vezes), adicionar amostra aos poços, não tocar a parede do poço tanto quanto possível e misturar suavemente.
3Incubação: Após fechar a placa com a membrana da placa de fechamento, incubação durante 30 minutos a 37°C.
4. Configurar líquido: solução de lavagem 30 (ou 20) vezes diluída 30 (ou 20) vezes com água destilada e reserva.
5. Lavar: Descobrir a membrana da placa de fechamento, descartar o líquido, secar por balanço, adicionar tampão de lavagem a cada poço, ainda por 30s, em seguida, drenar, repetir 5 vezes, secar por batida.
6. Adicionar enzima: adicionar 50 μl de reagente HRP-Conjugado a cada poço, excepto poço em branco.
7Incubação: operação com 3.
8Lavagem: operação com 5.
9. Cor: Adicionar solução de cromogénio A 50ul e solução de cromogénio B 50ul a cada poço, evitar a preservação da luz durante 10 minutos a 37°C
10. Parar a reação: Adicionar Solução de Paragem50μl a cada poço, Parar a reação ((a cor azul muda para amarelo).
11. Análise: tomar o poço em branco como zero, ler a absorvência a 450 nm após a adição da solução stop e dentro de 15 min
Calcule:
Pegue a densidade padrão como a horizontal, o valor OD para a vertical, desenhe a curva padrão em papel gráfico,Determine a densidade correspondente de acordo com o valor da amostra OD pela curva de amostra, multiplicado pelo múltiplo de diluição, ou calcular a equação de regressão linear da curva padrão com a densidade padrão e o valor OD,com o valor OD da amostra na equação,Calcular a densidade da amostra, multiplicado pelo fator de diluição, resulta a densidade real da amostra.
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