Anti jogos do teste do anticorpo de Elisa Test Kit Anti TPO da peroxidase do tiroide

Anti-TPO peroxidase Elisa Kit da antitróide

1. Uso pretendido

Immunoassay para in vitro a determinação quantitativa dos anticorpos à peroxidase do tiroide no soro humano. A anti determinação do ‐ TPO é usada como um auxílio no diagnóstico de doenças de tiroide autoimunes.

2. Sumário

• A peroxidase específica do ‐ do tiroide (TPO) esta presente nos microsomes dos thyrocytes e é expressada em sua superfície apical da pilha. Na sinergia com thyroglobulin (Tg) esta enzima tem uma função essencial no iodination de L tirosina do ‐ e o acoplamento químico do mono ‐ e iodotyrosine resultantes de di ‐ para formar as hormonas de tiroide T4, T3, e fT3.
• TPO é um autoantigen potencial. Os titers elevados do soro dos anticorpos a TPO são encontrados em diversos formulários do thyroiditis causados pela autoimunidade. O destilador encontrou frequentemente que o termo “anticorpo microsomal” origina do tempo em que TPO não tinha sido identificado ainda como um antígeno na autoimunidade causada por microsomes. No sentido clínico o anti ‐ TPO de dois termos e o anticorpo microsomal podem ser usados sinonimamente; há umas diferenças, contudo, no que diz respeito aos métodos do teste.
• Os anti titers altos do ‐ TPO são encontrados em até 90% dos pacientes com thyroiditis de Hashimoto crônico. Na doença de sepulturas, 70% dos pacientes têm um titer elevado. Embora a sensibilidade do procedimento possa ser aumentada simultaneamente determinando outros anticorpos do tiroide (anti ‐ Tg, de ‐ de TSH anticorpo do ‐ do receptor - TRAb), encontrar negativo não ordena para fora a possibilidade de uma doença autoimune. A magnitude do titer do anticorpo não correlaciona com a atividade clínica da doença. Inicialmente os titers elevados podem tornar-se negativos após períodos longos de doença ou durante a remissão. Se os anticorpos reaparecem remissão de seguimento, a seguir ter uma recaída é provável.
• Considerando que os testes microsomal usuais do anticorpo empregam microsomes unpurified como uma preparação do antígeno, os anti testes do ‐ TPO usam uma peroxidase refinada. Os dois procedimentos são do desempenho comparável em termos da sensibilidade clínica, mas o melhor ‐ do lote à consistência do lote do ‐ e a uma especificidade clínica mais alta pode ser esperado do anti ‐ TPO testa devido ao mais de alta qualidade do antígeno usou-se. A enzima ligou ensaios da imunoabsorção usa os anticorpos anti-humanos humanos de IgG do antígeno e do coelho (anti-IgG).

3. Princípio do teste

Método indireto, duração total do ensaio: 70 minutos.

O anti-TPO ELISA emprega a fase contínua, método indireto de ELISA para a detecção de anticorpos a TPO no procedimento da incubação do pas-de-deux. As tiras do microwell do poliestireno são pre- revestidas com os antígenos humanos altamente immunoreactive de TPO. Durante a primeira etapa da incubação, os anti-TPO anticorpos específicos, se atuais, serão limitados à fase contínua pré-revestiram antígenos de TPO. Os poços são lavados para remover as proteínas de soro desatadas, e os anticorpos anti-humanos de IgG do coelho (anti-IgG) conjugados à peroxidase do armorácio da enzima (conjugado de HRP-) são adicionados. Durante a segunda etapa da incubação, estes anticorpos HRP-conjugados serão limitados a todos os complexos do antígeno-anticorpo (IgG) formaram previamente e o HRP-conjugado desatado é removido então lavando. As soluções do cromogêneo que contêm Tetramethylbenzidine (TMB) e peróxido da ureia são adicionadas aos poços e na presença do antígeno-anticorpo-anti-IgG immunocomplex (HRP), os cromogêneos incolores hydrolyzed pelo conjugado encadernado de HRP a um produto azul-colorido. A cor azul gerencie amarelo após ter parado a reação com o ácido sulfúrico.

A quantidade de intensidade da cor pode ser medida e é proporcional à quantidade de anticorpo capturada nos poços, e à quantidade de anticorpo na amostra respectivamente.

4. Os materiais dos reagentes forneceram

• Microplate revestido, 8 X12 tiras, 96 poços. Pré-revestido com o antígeno humano de TPO.

• Calibradores, 6 tubos de ensaio, 1 mL cada um, prontos para uso; Concentrações: 0 (A), 25 (B), 50 (C), 100 (D), 250 (E) e 500 (F) IU/mL.

• O conjugado da enzima, 1 tubo de ensaio, 11,0 mL de HRP (peroxidase do armorácio) etiquetou o coelho os anti anticorpos humanos de IgG (anti-IgG) no amortecedor Tris-NaCl que contém BSA (albumina de soro bovino). Contém 0,1% preservativos ProClin300.

• Diluente do soro: 1 tubo de ensaio, 11mL. Contendo sais do amortecedor e uma tintura

• Concentrado da solução da lavagem, 1 tubo de ensaio, 25 ml (40X se concentrou), solução da lavagem do PBS-Tween.

• Carcaça, 1 tubo de ensaio, 11ml, pronto para uso, (tetramethylbenzidine) TMB.

• Pare a solução, 1 tubo de ensaio, 6,0 ml de 1 mol/l de ácido sulfúrico.

• IFU, 1 cópia.

• Tampa da placa: 2 partes.

Materiais exigidos (mas não fornecido)

• Leitor de Microplate com capacidade absorvente do comprimento de onda 450nm e 620nm.

• Arruela de Microplate.

• Incubadora.

• Abanador da placa.

• Micropipettes e micropipettes multichannel que entregam 50µl com uma precisão de melhor de 1,5%.

• Papel absorvente.

• Água destilada

5. Procedimento de teste

• Use somente o número de poços exigidos e formate os poços do microplate para que cada calibrador e amostra seja analisada.

• Adicione o µL 100 dos calibradores a cada poço.

• Adicione o µL 100 do diluente da amostra (cor verde) a cada poço exceto os Calibrador-poços.

• Adicione o µL 10 da amostra a cada poço do diluente da amostra (NOTA: Os reagentes em Wells girarão a cor azul do verde), a seguir agitam 30 segundos.

• Cubra a placa com uma tampa da placa e incube-a no °C 37 por 30 minutos.

• Rejeite os índices da micro placa pela decantação ou pela aspiração. Se decantando, bata e borre o seco de placa com papel absorvente.

• Adicione o µL 350 da solução da lavagem, decante-o (torneira e mancha) ou aspire-o. Repita 4 vezes adicionais para um total de 5 lavagens. No fim da lavagem, inverta a placa e bata para fora toda a solução residual da lavagem no papel absorvente.

• Adicione o µL 100 do conjugado da enzima,

• Cubra a placa com uma tampa da placa e incube-a no °C 37 por 30 minutos.

• Adicione o µL 350 da solução da lavagem, decante-o (torneira e mancha) ou aspire-o. Repita 4 vezes adicionais para um total de 5 lavagens. No fim da lavagem, inverta a placa e bata para fora toda a solução residual da lavagem no papel absorvente.

• Adicione o µL 100 da carcaça a cada poço. Cubra e incube na temperatura ambiental (18-25℃) na obscuridade para a reação por 10 minutos. Não agite a placa após a adição do substate.

• Adicione o µL 50 da solução da parada a cada poço.

• Agite por 15-20 segundos para misturar o líquido dentro dos poços. É importante assegurar-se de que as mudanças azuis da cor a amarelar completamente.

• Leia a absorvência de cada poço em 450 nanômetro (que usa 620 a 630 nanômetro como o comprimento de onda da referência para minimizar imperfeições boas) em um micro leitor da placa. Os resultados devem ser lidos dentro de 30 minutos da adição param a solução.