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Kit de detecção RT-PCR em tempo real de HDV (vírus da hepatite D)

Utilização prevista

Para oIn vitro detecção qualitativa de ARN HDVem soro ou plasma humano.diagnóstico, monitorização e quantificação da carga viralinfecção pelo vírus da hepatite D.

Parâmetros técnicos:

Princípio do ensaio

• RT-PCR em tempo real: Destina-se a uma região conservada daGenoma do VHD(por exemplo,R0ouHDAgGênero) utilizandoPrimers de sequência específica e sondas TaqMan(por exemplo, rotulado FAM).

• Alta sensibilidade e especificidade: Não há reactividade cruzada com o HBV, HCV ou outros vírus da hepatite.

• Controle interno (CI)Inclui- se para monitorizar a extracção de ARN e a inibição da PCR (por exemplo, controlo da RNase P ou do ARN sintético).

Componentes do kit

1. Mistura Mestra RT-PCR: Contémtranscriptase reversa, Taq polimerase de arranque quente, dNTPs e amortecimento otimizado.

2. Mistura de primer/sonda: oligonucleótidos específicos do VHD com sonda fluorescente (por exemplo, FAM para VHD, HEX/VIC para IC).

3. Controles:

   • Controle positivo: ARN HDV sintético ou vírus inactivado.

   • Controle negativoÁgua sem nuclease.

   • Controlo interno(se incluído).

4. Outros reagentes: Água sem DNase/RNase, tubos de reação (se fornecidos).

Fluxo de trabalho

1. Preparação da amostra: Extracção de ARN viral (compatível comQIAamp, MagMAX ou sistemas automatizados)).

2. Configuração de PCR: Misturar o ARN extraído com a mistura principal e os primers/sondagens.

3. Amplificação:

   • Transcrição inversa50°C durante 10 ̊15 min.

   • Ativação da PCR95°C durante 2°5 min.

   • Ciclismo: 40 ̊45 ciclos de 95°C (10 s) → 60°C (30 ̊60 s, leitura de fluorescência).

4. Análise:

   • Quantidade: Curva padrão para a carga viral (UI/ml ou cópias/ml).

   • Qualitativo: Ct valor limite para resultados positivos/negativos.

Características de desempenho

• Sensibilidade:≤ 10 ‰ 50 UI/ml(95% LOD).

• Distância linear:102 ‰ 108 UI/ml(conjuntos quantitativos).

• Especificidade: Não há reactividade cruzada com o VHB, VHC, HIV ou outros agentes patogénicos comuns.

• Precisão: CV < 5% para variabilidade intra e inter-análise.

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