Kit de ensaio ELISA de anticorpos (IgE)

UTILIZAÇÃO Destinada

  Este kit é uma detecção quantitativa do anticorpo IgE total (IgE) no soro/plasma humano in vitro.Os testes de IgE total podem também ser recomendados para doentes com suspeita de doenças parasitárias..

PRINCÍPIO DO TEST

  A hipersensibilidade imediata (alergias do tipo I) é mediada por IgE específica.o aumento do IgE específico em doentes é acompanhado de um aumento do título total de IgEEm geral, as unidades internacionais por mililitro (UI/mL) são definidas como: 1 UI/mL é igual a 2,4 ng IgE.Os níveis de IgE podem chegar a 50Além disso, os títulos de IgE são elevados em doentes com doenças parasitárias.

O reagente não é recomendado para o exame físico de pessoas saudáveis, testando resultados positivos ou negativos apenas em nome dos resultados positivos ou negativos dos testes de anticorpos IgE correspondentes,correlação incerteza com o paciente está doente e pode não ser como o único índice de avaliação de pacientes, deve ser combinado com a apresentação clínica do doente e outros testes de laboratório para análise integrada da doença.

O método de detecção deste kit é o imunotestamento ligado a enzimas.Os anticorpos monoclonais que reconhecem anti-IgE foram pré- revestidos nos poços da microplaca, e amostras de soro/plasma humano e outro anticorpo monoclonal marcado por enzimas foram adicionados aos poros da placa.O valor da OD foi lido e o seu conteúdo foi calculado por um leitor de microplacas.

Procedimento de ensaio

1.Todos os reagentes devem ser deixados a atingir a temperatura ambiente durante 15 minutos antes de serem utilizados.

2. Diluir o tampão de lavagem com uma diluição de 1:40 com água destilada antes da utilização.

3A amostra deve corresponder ao número de microplacas, cada placa deve ser dotada de poços de referência (o número de poços é determinado pela referência e pelo espécime a testar).

Nota: Para cada amostra, utilizar uma ponta separada da pipeta de eliminação, com referência a cada referência para evitar a contaminação cruzada.

4Adicionar 100 μl de diluente da amostra ao poço correspondente, adicionar 20 μl de cada ponto de referência S0, S1, S2, S3, S4, S5 e da amostra, respectivamente, ao poço correspondente.

5Agitar suavemente para misturar, incubar a 37°C durante 30 minutos com a membrana da placa de vedação a selar a placa.

6. No final da incubação, remover e descartar a tampa da placa. Tirar, adicionar tampão de lavagem para cada poço por 10 segundos. Repita 5 vezes. Após o ciclo de lavagem final, a água é lavada.Virar a placa sobre papel de borracha ou toalha limpa, e toque nele para remover quaisquer resíduos.

7Adicionar 100 μl de conjugado. Incubação a 37 °C durante 30 minutos com a membrana da placa de vedação a selar a placa.

8Lave o prato como no passo 6.

9. Adicionar o substrato A (50μL) e o substrato B (50μL). Agitar suavemente para misturar. Incubar a 37°C durante 10 minutos com a membrana da placa de vedação a selar a placa.

10Adicionar 50 μl de solução de interrupção a cada poço. Misturar suavemente agitando, ler a absorvência no prazo de 10 minutos após a interrupção da reação.Em seguida, leia o valor de absorção a 450 nm/ 630 nm com o leitor de microplacas.Calcular a concentração e avaliar os resultados.