O vírus da dengue é um flavivírus encontrado em grande parte nas zonas tropicais e subtropicais.
Os vírus da dengue são transmitidos por mosquitos, principalmente pelo Aedes aegypti e pelo Aedes albopictus.
Os vírus da dengue transmitidos por mosquitos (serotipo 1-4) causam febre dengue, uma doença grave semelhante à gripe.
O crescimento da população em regiões tropicais do terceiro mundo e a propagação para os países subtropicais desenvolvidos - incluindo os Estados Unidos.
que 50 a 80 milhões de casos de dengue ocorrem em todo o mundo a cada ano, incluindo uma forma potencialmente mortal da doença chamada
A infecção primária com o vírus da dengue resulta em uma auto-infecção.
doença limitante caracterizada por febre leve a elevada com duração de 3 a 7 dias, dor de cabeça grave com dor atrás dos olhos, dor muscular
A infecção secundária é a forma mais comum da doença em muitas partes do Sudeste
Esta forma de doença é mais grave e pode resultar em DHF e DSS.
Os sintomas podem incluir febre alta, hemorragias e insuficiência circulatória, e a taxa de mortalidade pode chegar a 40%.
O diagnóstico de DSS é particularmente importante, uma vez que os doentes podem morrer no prazo de 12 a 24 horas se não forem administrados tratamentos adequados.
administrado.
A infecção primária pelo vírus da dengue caracteriza- se por elevações dos níveis de antígeno NS1 específico 0 a 9 dias após o início da doença.
O diagnóstico precoce da dengue reduz o risco de complicações como DHF ou DSS,
especialmente nos países onde a dengue é endémica.
Procedimento de ensaio
1Todos os reagentes devem ser deixados a atingir a temperatura ambiente durante 15 minutos antes de serem utilizados.
2. Diluir o tampão de lavagem com uma diluição de 1:40 com água destilada antes da utilização.
3. Adicionar 100μL de Diluente de Amostra no poço correspondente, adicionar 10μL de amostra no poço correspondente (Não adicionar no poço em branco).Adicionar 100 μL de controlo positivo e controlo negativo ao poço de controlo positivo e ao poço de controlo negativoA amostra deve corresponder ao número de microplacas, cada placa deve ser dotada de 2 poços de controlo negativo, 1 poço de controlo positivo e 1 poço de controlo em branco.
Nota: Para evitar a contaminação cruzada, utilizar uma ponta de pipeta de eliminação separada para cada amostra, controlo negativo e positivo.
4Agitar suavemente para misturar durante 30 minutos. Incubação a 37°C durante 30 minutos com a membrana da placa de vedação a selar a placa.
5. No final da incubação, remover e descartar a tampa da placa. Tirar, adicionar tampão de lavagem a cada poço por 20 segundos. Repita 5 vezes. Após o ciclo de lavagem final, a água é lavada com um filtro de água.Virar a placa sobre papel de borracha ou toalha limpa, e toque nele para remover quaisquer resíduos.
6Adicionar o conjugado 50 μL (não adicionar no poço em branco).
7Incubar a 37°C durante 30 minutos com a membrana da placa de vedação a selar a placa.
8Adicionar o substrato A (50μL) e o substrato B (50μL) (não adicionar no poço em branco).
9. Adicionar 50μL de solução de interrupção a cada poço (não adicionar no poço em branco).Calibrar o leitor de placa com o Blank bem e ler a absorvência a 450nm. Se for utilizado um instrumento de filtro duplo, definir o comprimento de onda de referência em 630 nm. Não é permitido definir poços em branco se for utilizado um comprimento de onda duplo para detectar. Calcular o valor de corte e avaliar os resultados.
Armazenamento
• Conservar a 2- 8°C.
• Colocar os poços não utilizados na bolsa de alumínio laminado com fecho de fecho e voltar a 2- 8 °C, em que as condições os poços permanecerão estáveis durante 2 meses,ou até à data de validade indicada, consoante a que for anterior.
• Selar e devolver os calibradores não utilizados a 2-8 °C, em que condições a estabilidade será mantida durante 1 mês, para utilização mais prolongada, guardar os calibradores abertos em aliquotas e congelar a 20 °C.Evite múltiplos ciclos de congelamento e descongelamento.
• Selar e devolver todos os outros reagentes não utilizados a 2- 8 °C, em que as condições de estabilidade serão mantidas durante 2 meses ou até à data de validade indicada, consoante a que ocorrer primeiro.
Por favor verifique seu email!
