Kit de ensaio ELISA TB-IGRA

1Princípio

A TB-IGRA é umIn vitroteste de diagnóstico que detecta respostas imunes mediadas por células aMycobacterium tuberculosis(MTB) infecção através da medição do interferão- gama (IFN- γ) liberado pelas células T sensibilizadas após estimulação com antígenos específicos do MTB (por exemplo, ESAT-6, CFP-10 e TB7. 7).

2Características principais

• Alta especificidade:

  • Utiliza antígenos específicos do MTB (ausentes no BCG e na maioria das micobáctrias não tuberculosas), minimizando os falsos positivos.

• Alta sensibilidade:

  • Detecta tanto a infecção por tuberculose ativa como a infecção por tuberculose latente (LTBI) com uma precisão superior ao teste cutâneo por tuberculina (TST).

• Resultados quantitativos/qualitativos:

  • A saída varia consoante a plataforma (por exemplo, contagens pontuais nos ensaios ELISPOT ou concentração de IFN-γ no ELISA).

• Reacção rápida: Resultados tipicamente disponíveis no âmbito da24h48 horas.

3Requisitos de amostra

• Tipo de amostra: Sangue integral periférico fresco (heparinizado).

• VolumeNormalmente:1 ¢ 3 mlpor ensaio (varia consoante o fabricante do kit).

• Armazenamento: Processo interno8 ∙ 32 horas(dependendo das especificações do kit).

4Procedimento de avaliação

1. Estimulação: Incubação de sangue com antígenos MTB e controles (controle negativo/mitogénico).

2. Detecção de IFN-γ:

   • Baseado em ELISPOT (por exemplo, T-SPOT.TB): Contar as células T secretoras de IFN-γ como manchas.

   • Baseado em ELISA (por exemplo, QuantiFERON-TB Gold): Medir a concentração de IFN-γ através de um ensaio imunológico.

3. Interpretação:

   • Os resultados comparados com os valores de corte (variam consoante o ensaio).

   • Os resultados indeterminados podem exigir um novo teste.

5Metricas de desempenho

• Sensibilidade: > 90% para a tuberculose ativa, ~ 80% para a IBTL.

• Especificidade: > 95% (não afectado pela vacinação com BCG).

• Reatividade cruzada: Mínimo com micobactérias não tuberculosas (NTM).

6Indicações

• Criação de exames de detecção de LCT em grupos de alto risco (por exemplo, HIV+, doentes imunodeprimidos, contactos próximos).

• Teste suplementar para o diagnóstico da tuberculose activa (deve estar correlacionado com os sintomas clínicos e outros testes).

7Vantagens em relação ao TST

• Nenhuma reactividade cruzada com o BCG.

• Testes de visita única (sem devolução de leitura).

• Resultados objetivos, baseados em laboratório.

8Limitações

• Não é possível distinguir a tuberculose ativa da LTB.

• Requer equipamento de laboratório especializado.

• Mais caro que o TST.

• Potenciais falsos negativos em doentes imunodeprimidos.

9Kit compatíveis (exemplos)

• T-SPOT.TB(Oxford Immunotec): baseado em ELISPOT.

• QuantiFERON-TB Gold PlusBaseado em ELISA.

10Estatuto regulamentar

• Aprovado pela FDA/CE/OMS para rastreamento de infecção por tuberculose.

Diagnóstico in vitro

Apenas para uso

Este kit contém reagentes suficientes para testar um máximo de 28 amostras num ensaio.

1Controle negativo (capa cinzenta)

2Antígeno da tuberculose, liofilizado (capa roxa)

3. Diluente de Antígeno de TB (Capa roxa)

4Controle positivo (capa vermelha) 28 testes 28 testes 0,9 ml 28 testes

Componentes do ELISA

1. Microplacas

2. IFN-γ humano padrão, liofilizado (capa azul)

3. Diluente

4Anticorpo Marcado com Biotina (capuz amarelo) 12 x 8 poços 2 x frasco 1 x 40 ml 1 x 6 ml

5. Enzima Conjugado 100X Concentrado (Bota castanha) 1 x 130μL

6. Lavar tampão 10X Concentrar 1 x 40mL

7Solução de cromogénio A

8Solução de cromogénio B

9. Paragem Solução 1 x 6 ml 1 x 6 ml 1 x 6 ml

PRINCÍPIO DO TEST