2Diluir o tampão de lavagem com uma diluição de 1:40 com água destilada antes de utilizar.
3Adicionar 100μL de Diluente de Amostra no poço correspondente (Não adicionar no poço em branco, negativo
A amostra deve corresponder ao número de micro-
placa, cada placa deve ser fornecida com controle negativo 2 poços, controle positivo 1 poço e em branco
adicionar 5μL de amostra no poço correspondente, misturar bem usando a pipeta, adicionar
50μL de controlo negativo e controlo positivo para poços de controlo negativo e poços de controlo positivo (Não
adicionar no poço em branco).
Nota: Utilize uma ponta de pipeta de eliminação separada para cada amostra, controlo negativo e positivo para
evitar a contaminação cruzada.
4. Agitar suavemente para misturar durante 30 minutos. Incubação a 37°C durante 20 minutos com a membrana da placa de vedação
Fechando a placa.
5. No final da incubação, retirar e descartar a tampa da placa.
Repita 5 vezes. Após o último ciclo de lavagem, vire o prato para o lado
Papel de limpeza ou toalha limpa, e toque nela para remover quaisquer resíduos.
6. Adicionando respectivamente o Enzima Conjugado 50μL (não adicionar no poço em branco)
7Incubar a 37°C durante 20 minutos com a membrana da placa de vedação a selar a placa.
passo de lavagem durante 5 vezes como no passo 5.
8Adicionar o substrato A 50μL e o substrato B 50μL (não adicionar no poço em branco).
10 minutos com a membrana da placa de vedação a selar a placa.
9. Adicionar 50μL de solução stop a cada poço (não adicionar no poço em branco).
Calibrar o leitor de placas com o dispositivo de medição em branco.
Se for utilizado um instrumento de filtro duplo, definir o
O sistema de detecção de ondas de dois raios é utilizado para a detecção de ondas de 630 nm.
Valor limite e avaliar os resultados.
Cronometria: Leia a densidade óptica da amostra (OD) a 450 nm com um leitor de microplacas.
O valor médio de OD do controlo negativo ≤ 0,1 e o valor médio de OD do controlo positivo ≥ 0.8, o ensaio é válido,
Caso contrário, o teste é inválido.
Valor de corte (CO) = Valor médio de OD do controlo negativo x 3 (Calculado por 0,10 quando a média
O valor de OD do controlo negativo é < 0.10, calculado pelo valor real quando o controlo negativo médio OD
valor é > 0,10)
Resultados positivos: Valor da D.O. da amostra ≥ CO
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