Kit de teste Elisa anti-HCV

USO PRETENDIDO

O ensaio Anti-HCV é um ensaio imunoenzimático (ELISA) para a determinação qualitativa do vírus HCV em soro e plasma humanos.

Resumo

O vírus da hepatite C é a causa mais comum de hepatite não-A e não-B pós-transfusional e adquirida na comunidade em todo o mundo. A infecção pelo VHC leva frequentemente a hepatite crónica e cirrose, e está associada ao desenvolvimento de carcinoma hepatocelular.1 O vírus da hepatite C é um vírus de ARN de cadeia simples de sentido positivo, envelopado, que foi classificado como um género próprio na família Flaviviridae. O genoma consiste em ~9,5 kb que codifica um polipeptídeo de 3.000 aminoácidos de domínios estruturais e não estruturais.2 Como outros vírus de RNA, o genoma do HCV exibe heterogeneidade substancial como resultado de mutações que ocorrem durante a replicação viral. Em todo o mundo, foram descritos pelo menos 11 genótipos geneticamente distintos e múltiplos subtipos e variantes de vírus.3 A infecção com genótipos específicos pode afectar a gravidade da doença e a resposta ao tratamento.4 A hepatite C é transmitida principalmente através de sangue e produtos sanguíneos contaminados e, em menor extensão, pelas secreções do corpo humano.5

Princípio de teste

Método indireto.
Duração total do ensaio: 100 minutos
O ELISA Anti-HCV emprega método ELISA indireto de fase sólida para detecção de anticorpos contra HCV em procedimento de incubação em duas etapas. As tiras de micropoços de poliestireno são pré-revestidas com antígenos recombinantes altamente imunorreativos correspondentes ao núcleo e às regiões não estruturais do HCV (NS3, NS4 e NS5), que podem detectar todos os genótipos do HCV. Durante a primeira etapa de incubação, os anticorpos específicos anti-HCV, se presentes, serão ligados aos antígenos do HCV pré-revestidos em fase sólida. Os poços são lavados para remover proteínas séricas não ligadas e são adicionados anticorpos IgG anti-humanos de ratinho (anti-IgG) conjugados com a enzima peroxidase de rábano (conjugado HRP). Durante a segunda etapa de incubação, esses anticorpos conjugados com HRP serão ligados a quaisquer complexos antígeno-anticorpo (IgG) previamente formados e o conjugado HRP não ligado será então removido por lavagem. Soluções de cromogênio contendo tetrametilbenzidina (TMB) e peróxido de ureia são adicionadas aos poços e na presença do imunocomplexo antígeno-anticorpo-anti-IgG (HRP), os cromogênios incolores são hidrolisados ​​pelo conjugado HRP ligado a um produto de cor azul. A cor azul fica amarela após a interrupção da reação com ácido sulfúrico. A quantidade de intensidade da cor pode ser medida e é proporcional à quantidade de anticorpo capturado nos poços e à quantidade de anticorpo na amostra, respectivamente. Os poços contendo amostras negativas para Anti-HCV permanecem incolores.
 
 
Parâmetros técnicos:

Coleta e preparação de amostras

• O soro humano é recomendado para este ensaio.
• Tampe e armazene as amostras entre 18 e 25 ℃ por no máximo 8 horas. Estável por 7 dias a 2-8°C e 1 mês a -20°C. Congele apenas uma vez.
• Não utilize amostras inativadas pelo calor.
• Sedimentos e sólidos suspensos nas amostras podem interferir no resultado do teste e devem ser removidos por centrifugação. Certifique-se de que ocorreu a formação completa de coágulos nas amostras de soro antes da centrifugação.
• Evite amostras muito hemolíticas, lipémicas ou turvas.

PERGUNTAS FREQUENTES:

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